Cel badania Badanie ma na celu identyfikację materiału genetycznego (DNA) patogenu Clostridioides difficile oraz jego toksynotwórczych genów tcdA i tcdB w próbce kałowej przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (RT‑PCR). Potwierdzenie obecności genów toksynowych świadczy o zakażeniu toksynogennym, co pozwala na szybkie podjęcie odpowiedniej terapii.
Wskazania kliniczne Ostra biegunka trwająca co najmniej 3 dni, szczególnie po zakończeniu kuracji antybiotykowej. Objawy zespołu wywołanego przez C. difficile – krwawienie z odbytu, skurcze brzucha, gorączka. Kontrola skuteczności leczenia przeciwko C. difficile oraz monitorowanie nawrotów. Ocena przyczyn dysbiozy jelitowej u pacjentów z zaburzeniami neurorozwojowymi (ASD, PANS/PANDAS), u których infekcje jelitowe mogą nasilać objawy neurobehawioralne.
Wykrywanie nosicielstwa w ramach programów kontroli zakażeń szpitalnych. Materiał biologiczny Świeży lub zamrożony kał – minimum 2 g, pobrany w warunkach aseptycznych, bez dodatku środków dezynfekcyjnych. Próbka powinna być transportowana w pojemniku szczelnym, w temperaturze 2‑8 °C, nie dłużej niż 24 h od pobrania (lub zamrożona przy –20 °C do 7 dni).
Przygotowanie pacjenta Próbka kałowa powinna być pobrana przed podaniem leków przeciwbiegunkowych oraz po odstawieniu probiotyków i suplementów zawierających prebiotyki na co najmniej 24 h. Nie wymaga się specjalnej diety, jednak należy unikać wprowadzania do stolca substancji, które mogą hamować reakcję PCR (np. Metoda Procedura obejmuje kilka etapów: Ekstrakcję DNA z próbki kałowej przy użyciu dedykowanego zestawu, zapewniającego usunięcie inhibitorów PCR.
Amplifikację specyficznych fragmentów genów tcdA, tcdB oraz genów kontrolnych (np. 16S rRNA, wewnętrzna kontrola amplifikacji) w systemie RT‑PCR. Detekcję produktów amplifikacji w czasie rzeczywistym przy pomocy sond fluorescencyjnych, co umożliwia zarówno wykrycie, jak i ilościową ocenę ładunku bakteryjnego. Wynik Ct Włączenie kontroli hamowania (inhibitor control) oraz kontroli negatywnej, aby wykluczyć fałszywe wyniki.
Interpretacja wyników Wynik dodatni – wykryto geny toksyn tcdA i/lub tcdB. Potwierdza to zakażenie toksynogennym szczepem C. difficile i wskazuje na potrzebę rozpoczęcia lub modyfikacji antybiotykoterapii (np. metronidazol, wankomycyna, fidaksomycyna). Wynik ujemny – nie wykryto genów toksyn w badanej próbce. Nie wyklucza to obecności nietoksykowych szczepów C. difficile, ale klinicznie zmniejsza prawdopodobieństwo toksynowego zakażenia.