Cel badania Test transformacji limfocytów – Babesia metodą ELISpot ma na celu ocenę komórkowej odpowiedzi immunologicznej na antygeny Babesia spp. poprzez ilościowe oznaczenie limfocytów wydzielających interferon‑γ (IFN‑γ) po ich pobudzeniu. Badanie umożliwia wykrycie zarówno aktualnego, jak i przeszłego kontaktu z pasożytem, szczególnie w przypadkach niskiej parasitemii, kiedy tradycyjne badania mikroskopowe mogą dawać wynik fałszywie ujemny.
Wskazania kliniczne U osób z podejrzeniem babeszjozy (gorączka, objawy grypopodobne, zmęczenie, bóle mięśniowo‑stawowe). U pacjentów z przewlekłymi objawami neurologicznymi, neuro‑rozwojowymi lub immunologicznymi, w których babeszjoza może pełnić rolę czynnika współistniejącego (np. W diagnostyce współistniejących infekcji pasożytniczych u osób z zaburzeniami neurorozwojowymi. Do monitorowania skuteczności leczenia przeciwpasożytniczego oraz oceny odporności po terapii.
Materiał biologiczny Do badania wykorzystuje się krew pełną pobraną do probówki z antykoagulantem CPDA (citrate‑phosphate‑dextrose‑adenine). Próbka powinna być przetworzona w ciągu 24 h od pobrania w celu izolacji żywych komórek mononuklearnych (PBMC). Przygotowanie pacjenta Nie należy przyjmować leków immunosupresyjnych ani sterydów w ciągu 48 h przed pobraniem krwi, o ile nie jest to niezbędne medycznie. W dniu pobrania zaleca się unikanie intensywnego wysiłku fizycznego.
Próbkę pobiera się z żyły obwodowej, najlepiej rano, po 8‑godzinnym okresie postu, aby zminimalizować wpływ fluktuacji metabolicznych. Metoda ELISpot (Enzyme‑Linked ImmunoSpot) polega na: Izolacji PBMC z krwi pełnej przy użyciu gradientu density (np. Rozsadzeniu komórek w specjalnych płytkach pokrytych przeciwciałami przeciw IFN‑γ. Stymulacji komórek antygenem Babesia (zwykle wyekstrahowanym białkiem lub lysatem całego pasożyta).
Inkubacji przez 18‑24 h, w trakcie której aktywowane limfocyty wydzielają IFN‑γ, który wiąże się z przeciwciałami na płytce. Detekcji wydzielonego cytokiny przy użyciu enzymatycznego podłoża, co prowadzi do powstania widocznych „plam” – każdy plamka reprezentuje pojedynczy komórkę produkującą IFN‑γ. Zliczania plamek przy pomocy automatycznego czytnika ELISpot i wyrażenia wyniku jako liczby plamek na 10⁵ PBMC.
Interpretacja wyników Wynik dodatni – zwiększona liczba plamek (zwykle > 50 plamek/10⁵ PBMC) wskazuje na aktywną lub przeszłą odpowiedź komórkową przeciwko Babesia, co potwierdza zakażenie. Wynik negatywny – liczba plamek w granicach tła ( Wartość graniczna może być dostosowana do populacji referencyjnej laboratorium; interpretacja powinna uwzględniać historię kliniczną i wyniki innych badań (np.