Cel badania Badanie ma na celu wykrycie oraz ilościową ocenę białek składowych P‑ciał (processing bodies) w komórkach neuronalnych przy zastosowaniu metody Western blot. P‑ciała są kluczowymi organellami zaangażowanymi w kontrolę metabolizmu mRNA, degradację niepotrzebnych transkryptów oraz w reakcje stresowe komórek nerwowych. Wskazania kliniczne Ocena dysfunkcji regulacji mRNA u pacjentów z autyzmem spektrum (ASD).
Monitorowanie przebiegu i ryzyka zespołów neuroimmunologicznych, takich jak PANS i PANDAS. Badanie osób z objawami zaburzeń pamięci, deficytów poznawczych lub innych nieprawidłowości w szlakach stresowych i degradacji RNA. Wsparcie badań naukowych nad patofizjologią zaburzeń neurorozwojowych. Uzupełnienie diagnostyki w przypadkach podejrzenia nieprawidłowości w procesach post‑transkrypcyjnych.
Materiał biologiczny Izolowany ekstrakt białkowy pochodzący z neuronalnych eksosomów uzyskanych z krwi (plazma lub surowica) lub bezpośrednio z płynu mózgowo‑rdzeniowego (CSF), w zależności od wskazań klinicznych i dostępności materiału. W przypadku pobrania CSF – zaleca się pobranie 2‑3 ml przy użyciu standardowej techniki nakłucia lędźwiowego. Próbki muszą być przechowywane w temperaturze –80 °C do momentu analizy, aby zapobiec degradacji białek.
Metoda Procedura obejmuje następujące etapy: Rozdzielenie białek w żelu poliakrylamidowym pod wpływem SDS‑PAGE. Transfer białek na membranę nitrocelulozową lub PVDF. Inkubacja z monoklonalnymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko charakterystycznym markerom P‑ciał, takim jak DCP1a, GW182, LSM1 oraz XRN1. W zależności od protokołu można dodać przeciwciała przeciwko dodatkowym markerom (np.
Detekcja przy użyciu podłoża chemiluminescencyjnego lub fluorescencyjnego oraz kwantyfikacja intensywności pasm za pomocą densytometrii. Wynik wyrażany jest jako stosunek sygnału badanego do wewnętrznego kontrolera (np. β‑aktyna) i porównywany z wartościami referencyjnymi. Przygotowanie pacjenta Nie wymaga głodówki; zaleca się unikanie intensywnego wysiłku fizycznego oraz spożycia alkoholu w ciągu 24 h przed pobraniem próbki.
Przy pobieraniu CSF – standardowe przygotowanie do nakłucia lędźwiowego, w tym wywiad pod kątem przeciwskazań (np. zaburzenia krzepnięcia, infekcje). Przy pobieraniu krwi – standardowa cewnikowanie żylne, pobranie w warunkach aseptycznych, użycie probówek zawierających inhibitor proteaz. Próbki powinny być transportowane w lodzie i dostarczone do laboratorium w ciągu 2 h od pobrania.