Cel badania Badanie ma na celu wykrycie obecności oraz określenie liczby kopii DNA wirusa ludzkiego herpes typu 8 (HHV‑8) w dostarczonej próbce. Dzięki temu możliwe jest stwierdzenie aktywnego zakażenia, ocena stopnia replikacji wirusa oraz identyfikacja pacjentów zagrożonych rozwojem chorób związanych z HHV‑8. Wskazania kliniczne Diagnostyka i kontrola przebiegu raka Kaposiego (ICD‑10: C46).
Potwierdzenie lub wykluczenie pierwotnego płynnego chłoniaka (Primary Effusion Lymphoma) oraz innych nowotworów wywołanych przez HHV‑8. Ocena ryzyka powikłań u osób zakażonych HIV/AIDS, u których współwystępowanie HHV‑8 zwiększa podatność na nowotwory i choroby skórne. Badanie statusu zakażenia u dawców organów i tkanek przed przeszczepem.
W kontekście zaburzeń neurorozwojowych (w tym autyzmu) – test może być wskazany przy podejrzeniu dysfunkcji immunologicznej wpływającej na objawy neuro‑immunologiczne. Monitorowanie skuteczności terapii przeciwwirusowej lub immunosupresyjnej u pacjentów z udokumentowanym zakażeniem HHV‑8. Materiał biologiczny Krew pełna pobrana do probówki z antykoagulantem EDTA – najczęstszy materiał. Plazma lub surowica – stosowane, gdy potrzebna jest ocena wolnego DNA wirusa w osoczu.
płyn opłucnowy, płyn mózgowo‑rdzeniowy, płyn z wycieków nowotworowych) – wykorzystywane w zależności od klinicznego zapotrzebowania. zmiany skórne Kaposi) – może być analizowana po odpowiedniej ekstrakcji DNA. Metoda Wykorzystuje się reakcję łańcuchową polimerazy w wersji ilościowej (qPCR) z detekcją fluorescencyjną. Procedura obejmuje: Izolację wysokiej jakości DNA z wybranego materiału przy użyciu zestawów komercyjnych spełniających normy ISO.
Amplifikację specyficznych regionów genomu HHV‑8, najczęściej genów ORF‑26 lub LANA‑1, przy użyciu zestandaryzowanych primerów i sond. Wykorzystanie sondy hydrolytowej (TaqMan) pozwalającej na precyzyjne wyznaczenie liczby kopii DNA na mililitr próbki. Włączenie kontroli wewnętrznej (np. ludzki gen β‑aktyny) w celu wykluczenia inhibitorów PCR i oceny jakości wyodrębnionego DNA.
Przygotowanie pacjenta Przed pobraniem krwi nie jest wymagana specjalna dieta ani odstawienie leków, chyba że lekarz zaleci inaczej (np. w przypadku leków przeciwzakrzepowych przed pobraniem płynów ustrojowych). Próbki powinny być transportowane w temperaturze 2‑8 °C i analizowane w ciągu 24 h, lub zamrożone w –20 °C/-80 °C przy dłuższym przechowywaniu. Interpretacja wyników Negatywny wynik – brak wykrywalnego DNA HHV‑8 w próbce.