Cel badania Identyfikacja fragmentów DNA pasożyta Cryptosporidium parvum w próbce kału przy zastosowaniu reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (qPCR). Badanie ma na celu potwierdzenie aktywnej infekcji, co umożliwia podjęcie odpowiedniego leczenia oraz ocenę ryzyka powikłań. Wskazania kliniczne Ostre lub nawracające biegunki, zwłaszcza po podróży do obszarów o podwyższonym ryzyku zakażeń pasożytniczych.
zakażenie HIV/AIDS, nowotwory, terapia immunosupresyjna lub przyjmowanie leków biologicznych. Przewlekłe dolegliwości żołądkowo‑jelitowe u dzieci i dorosłych, w tym u pacjentów z ASD, u których obserwuje się dysbiozę i zwiększoną przepuszczalność jelit. Kontrola skuteczności leczenia przeciwpasożytniczego. Badania epidemiologiczne mające na celu identyfikację źródeł zanieczyszczenia wody lub żywności.
Materiał biologiczny Świeży lub zamrożony kał – minimum 5 g stałego materiału lub 5 ml płynu kałowego. Próbka powinna być dostarczona w szczelnie zamkniętym pojemniku, najlepiej w ciągu 24 h od wypróżnienia; przy dłuższym czasie przechowywania należy zamrozić w temperaturze –20 °C i dostarczyć w ciągu 7 dni.
Metoda Procedura obejmuje izolację DNA z kału, a następnie amplifikację specyficznych regionów genetycznych pasożyta, najczęściej genu 18S rRNA, przy użyciu reakcji PCR w czasie rzeczywistym (qPCR). Charakterystyka metody: Czułość: wykrycie od 10 do 20 kopii DNA w próbce, co pozwala na identyfikację nawet niskiego poziomu zainfekowania. Specyficzność: zapewniona przez pary starterów oraz sondę hybrydacyjną dedykowaną C.
parvum, minimalizującą ryzyko fałszywych wyników pozytywnych. Możliwość rozszerzenia: w ramach panelu wielopasożytniczego można jednocześnie oznaczyć inne patogeny (np. Giardia lamblia, Entamoeba histolytica). Kontrola jakości: wewnętrzny kontrolny fragment DNA ludzkiego (np. β‑aktyna) potwierdza prawidłową izolację materiału i brak inhibitorów PCR.
Przygotowanie pacjenta Przygotowanie jest proste i nie wymaga specjalnej diety, jednak zaleca się: Unikanie przyjmowania antybiotyków, leków przeciwpasożytniczych oraz preparatów zawierających probiotyki na co najmniej 48 h przed pobraniem próbki, o ile jest to możliwe. Dokładne zebranie próbki zgodnie z instrukcją – unikać zanieczyszczenia moczem lub wodą. Interpretacja wyników Wynik dodatni: stwierdzenie obecności DNA C.