Cel badania Badanie LTT na grzyby pleśniowe (ICD: LTT‑GB) ma na celu ocenę reakcji komórkowej limfocytów T po stymulacji wybranymi antygenami grzybów pleśniowych. Test wykrywa opóźnioną reakcję immunologiczną typu IV, której nie wykrywa standardowy test IgE, a więc umożliwia identyfikację ukrytych nadwrażliwości na drobnoustroje pleśniowe. Wskazania kliniczne Przewlekłe objawy układu oddechowego (katar, duszność, astma) nie wyjaśnione innymi testami alergicznymi.
Utrzymujące się zapalenie zatok, mukowiscydoza lub inne choroby płuc, w których podejrzewa się wpływ pleśni. Objawy neurobehawioralne – trudności z koncentracją, nadpobudliwość, zmiany nastroju – które mogą nasilać się po ekspozycji na mykotoksyny, szczególnie u pacjentów z ASD, PANS lub PANDAS. Planowanie interwencji środowiskowych (dezaktywacja źródeł pleśni, odkwaszanie pomieszczeń) oraz ocena ryzyka reakcji immunologicznej przed takimi działaniami.
Rozpoznanie nadwrażliwości u pacjentów z chorobami autoimmunologicznymi, w których pleśń może pełnić rolę czynnika wyzwalającego. Materiał biologiczny Krew pełna pobrana z żyły obwodowej (zazwyczaj 5‑10 ml) do probówki zawierającej antykoagulant EDTA. Metoda Po pobraniu krwi izolowane są limfocyty mononuklearne (PBMC). Komórki te inkubuje się z przygotowanymi antygenami charakterystycznych grzybów pleśniowych (np.
Aspergillus fumigatus, Penicillium chrysogenum, Cladosporium cladosporioides) w różnych stężeniach. Proliferacja limfocytów jest oceniana jedną z następujących technik: Włączenie radioaktywnego markera 3H‑TdR i pomiar emisji po 72‑96 h inkubacji. Fluorometryczne znakowanie CFSE (carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester) z późniejszą analizą przepływową (flow cytometry).
Alternatywnie, test może wykorzystać metodę ELISpot do wykrywania wydzielania cytokiny IFN‑γ jako wskaźnika aktywacji komórek. Wynik podawany jest jako Stimulation Index (SI) – stosunek proliferacji w obecności antygenu do proliferacji w warunkach kontrolnych. Przygotowanie pacjenta Nie wymaga głodówki; pacjent może spożywać posiłki zgodnie z codziennym trybem życia.
Należy unikać leków mogących tłumić odpowiedź immunologiczną (kortykosteroidy, cyklosporyna, metotreksat) oraz leków przeciwhistaminowych na minimum 48 h przed pobraniem krwi, o ile nie zagraża to bezpieczeństwu pacjenta. Pacjent powinien zgłosić laboratorium wszelkie aktualne terapie, choroby autoimmunologiczne oraz ostatnie szczepienia. Interpretacja wyników SI – brak istotnej proliferacji, wynik uznawany jest za negatywny.