Cel badania Badanie ma na celu wykrycie dwóch najważniejszych polimorfizmów w genie MTHFR: c.665C>T (p.Ala222Val, znany jako C677T) oraz c.1286A>C (p.Glu429Ala, znany jako A1298C). Oba warianty redukują wydajność enzymu metylotetrahydrofolian reduktazy, co zakłóca szlak folianowo‑metylowy, podnosi stężenie homocysteiny we krwi oraz wpływa na procesy metylacji DNA i syntezę neuroprzekaźników.
Wskazania kliniczne Łagodna lub umiarkowana hiperhomocysteinemia (homocysteina >10 µmol/L). Historia zakrzepicy, zakrzepicy żył głębokich lub zatorowości płucnej. Problemy reprodukcyjne: nawracające poronienia, niepowodzenia w zapłodnieniu in vitro, zaburzenia płodowo‑maciczne. Objawy neurologiczne i psychiatryczne: migreny, zaburzenia nastroju, zaburzenia poznawcze, stany lękowe.
Rozpoznanie lub podejrzenie zaburzeń neurorozwojowych, w tym autyzmu (ASD), zespołu Aspergera, ADHD. Ocena ryzyka powikłań sercowo‑naczyniowych przy jednoczesnym niedoborze kwasu foliowego lub witaminy B12. toczeń, choroba Hashimoto) – w których zaburzenia metylacji mogą nasilać przebieg.
Materiał biologiczny Do analizy potrzebna jest jednorazowa próbka krwi pełnej pobrana do probówki z EDTA (0,5‑2 ml) lub wymaz z jamy ustnej (buccal swab) w sytuacji, gdy pobranie krwi jest niemożliwe lub niewskazane. Przygotowanie pacjenta Nie wymaga się specjalnej diety ani postu. Zaleca się jednak wstrzymanie suplementacji kwasu foliowego i witaminy B12 na co najmniej 24 h przed pobraniem, aby nie zakłócały interpretacji wyników biochemicznych (poziom homocysteiny).
W przypadku wymazu ustnego pacjent powinien powstrzymać się od jedzenia i picia przez minimum 30 min przed pobraniem. Metoda DNA izolowane z materiału biologicznego poddawane jest amplifikacji metodą PCR, a wykrycie konkretnego allelu realizowane jest jedną z poniższych technik: Sekwencjonowanie metodą Sanger – zapewnia pełną sekwencję regionu obejmującego oba polimorfizmy, umożliwiając potwierdzenie wyniku oraz wykrycie ewentualnych dodatkowych mutacji.
Real‑time PCR z sondami hybrydowymi (TaqMan) – szybka, wysoce czuła metoda skierowana wyłącznie na warianty C677T i A1298C. Obie techniki charakteryzują się czułością i swoistością przekraczającą 99 % oraz limitami wykrywalności pozwalającymi na analizę nawet przy niskiej jakości DNA. Wyniki i interpretacja Raport podaje genotyp dla każdego z badanych wariantów: C677T (c.665C>T): CC – genotyp dziki, ryzyko podwyższonej homocysteiny niskie.