Cel badania Badanie ma na celu identyfikację genotypu antygenów płytkowych HPA‑1 (allele HPA‑1a i HPA‑1b) poprzez analizę jednonukleotydowego polimorfizmu c.176T>C w genie ITGB3, kodującego podjednostkę β3 integryny płytkowej. Wynik pozwala ocenić ryzyko konfliktu płytkowego matka‑płód oraz potwierdzić diagnozę neonatalnej alloimmunologicznej małopłytkowości (NAIT).
Wskazania kliniczne Noworodkowa małopłytkowość ( Historia wcześniejszych przypadków NAIT u rodzeństwa lub u samej matki. Krwiaki wewnątrzczaszkowe, krwawienia podskórne lub inne objawy sugerujące immunologiczną destrukcję płytek u noworodka. Trudności w uzyskaniu skutecznej transfuzji płytek u pacjentów wymagających długotrwałego wsparcia hematologicznego.
Planowanie transfuzji płytek zgodnych z HPA w sytuacjach wysokiego ryzyka, w tym przy planowanej operacji neonatologicznej. Ocena ryzyka zaburzeń rozwojowych, w tym wpływu ciężkiej małopłytkowości na rozwój neurologiczny i potencjalne powiązanie z zaburzeniami ze spektrum autyzmu. Materiał biologiczny Krew pełna pobrana do probówek z EDTA (2‑5 ml) od noworodka, matki oraz – jeżeli to możliwe – ojca.
Alternatywnie DNA izolowane z wymazu śluzowego (wymaz buccalny) lub z krwi żylnej u dorosłych. Próbki powinny być transportowane w temperaturze 2‑8 °C i dostarczone do laboratorium w ciągu 48 h od pobrania. Metoda Genotypowanie przeprowadzane jest jedną z następujących, wysoce czułych technik: PCR ze specyficznymi starterami dla alleli HPA‑1a (c.176T) i HPA‑1b (c.176C), a następnie sekwencjonowanie metodą Sanger lub analiza fragmentu PCR w czasie rzeczywistym (real‑time PCR).
Allele‑specific PCR (AS‑PCR) – amplifikacja selektywna, umożliwiająca szybkie rozróżnienie homozygoty od heterozygoty. Platforma Luminex® (mikropłytki) – hybrydyzacja sondy specyficznej dla wariantu c.176T>C i detekcja w oparciu o technologię opartyą na kulkach fluorochromowych. Wszystkie wymienione metody charakteryzują się czułością >99 % i specyficznością >98 %. Przygotowanie pacjenta Nie wymaga specjalnych przygotowań.
Próbkę krwi należy pobrać w warunkach aseptycznych, najlepiej przed podaniem leków przeciwpłytkowych, immunoglobuliny lub transfuzją płytek, aby uniknąć zafałszowania wyniku. Dzieciom noworodkowym zaleca się pobranie krwi po 24 h od narodzin, aby minimalizować ryzyko hemolizy. Interpretacja wyników HPA‑1a/a (c.176T/T) – brak allelu HPA‑1b; ryzyko konfliktu płytkowego istnieje jedynie, gdy matka jest nosicielem HPA‑1b.